囊胚期胚胎二次冷藏复苏移植1例的出生结局和儿童发育情况随访

体细胞会的冷藏保存是除此以除此以外子殖技术(ART)治疗之此前的极为重要三组成部分，通过冷藏保存可以将病人可避免的体细胞会保存下来，减低病人的产不止哺乳百余人。体细胞会的 冷藏保存可以在体细胞会愈合的任意阶段进行时，如有的之此前心常规冷藏线粒体期体细胞会或卵裂期体细胞会，现在随着人才法制的齐备，越来越多的IVF之此前心进行时子殖细胞会培 喂养以期减低哺乳百余人和降低多滑哺乳百余人，因此研究成果者更为倾向于进行时子殖细胞会冷藏保存。冷藏方法有可以为服务器端 化较慢冷藏，也可以为玻璃窗化冷藏。我们之此前心自 2004年起，对第3天复制后的体细胞会全部进行时子殖细胞会人才，如有子殖细胞会呈现不止则进行时玻璃窗化冷藏保存。然而在临床管理工并作之此前常存在一些偶发的意除此以外具体情况，如病人在停滞不前复制日因心脏病性因素未能进行时体细胞会复制，仅仅将停滞不前的体细胞会丢失或其后冷藏后择期停滞不前复制。但是我们未能理应定子殖细胞会二次玻璃窗化冷藏后的稳定性性如何。目此前关于本能体细胞会二次冷藏的史料较少，尽管有史料刊文了一些流感并能在体细胞会二次冷藏停滞不前复制后赢取活产，但这些刊文多为第一次冷藏为线粒体 期体细胞会或卵裂期体细胞会，停滞不前后人才至子殖细胞会其后冷藏[1。4]。Kumasako等[3]普遍认为二次冷藏不会降低基底 滑的种植百余人，但是关于子殖细胞会冷藏停滞不前后其后冷藏复 苏复制的刊文极少。且据我们所知，尚无研究成果来分 析子殖细胞会二次玻璃窗化冷藏停滞不前复制后的不止子故事情节。在 此流感刊文之此前，我们所述了子殖细胞会二次冷藏停滞不前复制 后男婴的不止子故事情节，并对此病人的夫妻俩进行时长期以来 随访注意到，详细记录了此幼儿的身形愈合具体情况。一、临床资料病人34岁，前夫35岁，因输卵管因素原发不母 到我院子殖之此前心就诊，不母期内6年。根据21世纪宁更远 子秘密三组织标准，男方精混合物匹配也就是说。病人2005年在本 之此前心进行时腺体性刺激后**，在**长周期所改用的催 排卵方案按照本之此前心的常规进行时，在上一长周期的黄 体期开始应用于催性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)，当垂体达致降恒定后，用肝细胞性刺激素(FSH，果纳芬，默克)进行时腺体性刺激。当主导肝细胞直径约达致18～ 20 rnlTl时，药剂人绒毛膜催性腺激素(HCG，艾泽，默克)，38 h后进行时阴道医学影像驱使的肝细胞穿刺来获取腺体会。合计赢取13枚腺体会，进行时常规授精后， 13枚腺体会子殖，在子殖后第3天注意到体细胞会的卵裂具体情况，挑选2枚优质体细胞会进行时复制。复制后剩余的 11枚卵裂期体细胞会经病人知情首肯后全部进行时子殖细胞会人才，在子殖后第5日或第6日分别注意到子殖细胞会呈现不止具体情况及型态。改用Gardner评分了控制系统子殖细胞会进行时评分，该病人合计呈现不止2枚子殖细胞会，子殖细胞会评分计有4BB和4BC。将所呈现不止的子殖细胞会按照我之此前心常规方法有[5]进行时玻璃窗化冷藏，具体内容操为：子殖细胞会冷藏此前进行时人工皱缩，即用红除此以外 控制系统在更周遭内细胞会团长的经年累月细胞会连接稳固处原子笔，让囊腔混合物流不止，使细胞会皱缩成团长；然后将子殖细胞会装进含有7．5％DMSO和7．5％乙二醇的亦同最大限度混合物之此前最大限度 2 min，最后移入玻璃窗化冷藏混合物之此前最大限度30 s，将体细胞会转 移至冷藏的环(cryoloop的环)上，直接挤出混合物氮保存。 病人新鲜长周期复制未赢取哺乳，**3个月于是命 者进行时冷藏子殖细胞会停滞不前复制。人工长周期立即内膜，月经 第2"-4天行常规B超检验，给予戊酸雌二醇(补佳乐，先灵，德国)口服，口服剂量根据病人以往的内膜具体情况 修正(2～18 rag／d)。B超监测内膜子长具体情况，当内膜厚 度达致8 ITlln时肌肉药剂黄体酮(20 rng×2 d，40 mgX 2 d，20--一40 mg×1 d)，药剂后第6天行子殖细胞会停滞不前复制。复制此前1 d按照我之此前心常规方法有[5]进行时子殖细胞会停滞不前：立即子殖细胞会停滞不前混合物，在体细胞会人才皿内混和0．33 mol／L、0．2 mol／L蔗糖溶混合物和基本人才混合物(GMoPS Plus， Vitrolife，荷兰)，从混合物氮之此前取走上头有子殖细胞会的冷藏的环，热气 之此前停留5 S后，将体细胞会依次挤出上述停滞不前混合物之此前，时间分 别为2 min、3 min和5 min。停滞不前后的2枚子殖细胞会均进行时 红除此以外除此以除此以外卵，考虑在更周遭细胞会团长的半透明丢下躯干切割半透明上头的1／4左右。最后将子殖细胞会移人月份立即好的 子殖细胞会人才混合物(G2，ⅥnDlife，荷兰)之此前，放置37℃、6％OQ 和5％Q人才箱内人才16 h。复制此前注意到子殖细胞会的扩张 和断奶具体情况。 该病人在子殖细胞会停滞不前复制日心脏病急性胃病不必 进行时子殖细胞会复制，在病人知情首肯的此前提下其后按照上述子殖细胞会玻璃窗化冷藏操并作步骤进行时体细胞会冷藏。病人一手 术6个月后其后进行时冷藏子殖细胞会停滞不前复制，具体内容操并作步骤同上，子殖细胞会停滞不前后16 h进行时复制，病人成功哺乳，并于母38周分娩一身心中村康女婴，淡水52 CITI，身型3 550 g。 由于这是本之此前心第1事例子殖细胞会二次冷藏的病人，所以我们对其女进行时了长期以来的随访。夫妻俩的父亲身材高大为 185 cm，父母身材高大为167 cm夫妻俩1岁时，身材高大83 cm， 身型12 kg；3岁时，身材高大97cm，身型21kg，身体中村 康，无哮喘；5岁时，身材高大117 cm，身型31 kg；7岁时，身材高大135cm，身型40 kg；9岁时身材高大154cm，身型50 kg；12岁时，身材高大168 cm，身型62 kg；10岁时，乳房不止现愈合；12岁时月经初潮。该女孩稳重，参加学全校管乐队、全校篮球等集体活动，并取得比较好的成绩，其智力也就是说，教学能量密度在高三此前5名。二、探讨在此流感之此前，病人赢取13枚成熟腺体会，13枚腺体会子殖，经过人才后呈现不止2枚子殖细胞会并玻璃窗 化冷藏保存。病人在亦同定子殖细胞会停滞不前复制日心脏病急性胃病，在其知情首肯的此前提下将停滞不前后的子殖细胞会其后冷藏保存。此为临床管理工并作之此前一些难以避免的具体情况。如果将病人体细胞会丢失颇为可惜，而体细胞会其后冷藏保存 的稳定性性尚不明理应。到目此前为止，虽然已经有一些基底 滑在二次冷藏后赢取活产的流感刊文，但都是第一次 体细胞会冷藏后于线粒体期或卵裂期体细胞会，停滞不前后人才至子殖细胞会阶段其后冷藏。本研究成果是首次对子殖细胞会二次玻璃窗化 冷藏后赢取的活产进行时长期以来随访的流感刊文。 有学者曾经用豚鼠体细胞会研究成果连续不断冷藏停滞不前对体细胞会的影摇动，他们见到与未冷藏的体细胞会相比，冷藏体细胞会 在断奶时的细胞会近大抵少，且豚鼠体细胞会并能在成功的 连续不断冷藏停滞不前3次后仍然不具人体内愈合控制能力[6]。在此流感之此前，我们对比了两次冷藏此前后子殖细胞会的型态学变化，第1次冷藏是在第5天，子殖细胞会为4期，能量密度为 4BB，第一次停滞不前后人才16 h，子殖细胞会仅仅断奶，被选为 6期子殖细胞会，能量密度为6BB；第2次冷藏停滞不前后，人才16 h 子殖细胞会能量密度为6BB。子殖细胞会型态从结构上看，两次冷藏后 没负可称，子殖细胞会细胞会存活良好，有如子殖细胞会阶段体细胞会的 二次玻璃窗化冷藏对体细胞会的愈合无太大影摇动。统计分析原 因，我们普遍认为可能与以下几个上都有关。首先，子殖细胞会在冷藏之此前进行时了红除此以外皱缩，将子殖细胞会腔内混合物全部放 不止，使子殖细胞会腔下陷，待子殖细胞会仅仅皱缩后再进行时子殖细胞会的 玻璃窗化冷藏，这样并能减少冷藏过程之此前冰晶的呈现不止， 降低对体细胞会的挫伤。有研究成果也得出结论子殖细胞会的人工皱缩 并能合理减低子殖细胞会冷藏后停滞不前的存活百余人[7-9]。而且冷藏子殖细胞会停滞不前后的除此以除此以外卵也颇为极为重要，在体细胞会冷藏过程之此前，本能子殖细胞会的半透明上头变硬，会容许体细胞会的向除此以外孵 不止，有研究成果普遍认为子殖细胞会在扩张过程之此前不断地减慢皱缩， 如果在半透明上头不止口处坎的次近多了，子殖细胞会就会衰亡[10]。而且，冷藏停滞不前后的子殖细胞会，由于刚刚停滞不前后囊 基底腔还处于皱缩状况，体细胞会和半透明上头二者之间的过道能比 大于卵裂期体细胞会的过道，因此子殖细胞会的除此以除此以外卵更为稳定性。我们的近据见到，未经过除此以除此以外卵的子殖细胞会，停滞不前后往常人才，仅仅断奶的百分比(340A)更远低于红除此以外卵后的子殖细胞会(85％)，更为高的断奶百分比意味着更为高的着床 机会。其次，子殖细胞会的冷藏保存不同于卵裂期体细胞会，它 自身有很多优点。并能愈合至子殖细胞会阶段的体细胞会经过 二次考虑，愈合控制能力出现可称常的体细胞会已经被止步；子殖细胞会的 细胞会近目多，更是是经年累月细胞会层细胞会，挫伤后修复控制能力强，少近细胞会死亡后对体细胞会愈合控制能力影摇动小；子殖细胞会 的细胞会更为小，呈梭形，表面积／体积比大，对油脂、复水引致的体积变化耐受性更为佳[11]。因此我们猜测子殖细胞会 二次冷藏后细胞会没挫伤的因素可能与此有关。 目此前虽然有一些体细胞会二次冷藏赢取活产的报 道，但是对男婴长期以来随访的刊文颇为少见。在此流感之此前，子殖细胞会经过二次玻璃窗化冷藏后，仍然并能成功 种植，病人在足月分娩一也就是说身型的男婴，也提示 子殖细胞会二次冷藏似乎十分影摇动男婴的不止子故事情节。温习史料，我们见到在2011年的一项小型研究成果之此前，并作 者统计分析了一次冷藏和二次冷藏后体细胞会不止子故事情节的负 可称[12]。在文之此前一次冷藏，就是将2PN期或卵裂期的体细胞会进行时冷藏保存，停滞不前后复制；二次冷藏指称的是 冷藏的体细胞会停滞不前后进行时人体内人才至子殖细胞会阶段，再进 行冷藏。结果提示二次冷藏三组的双滑百余人低于一次冷藏三组，他们普遍认为是二次冷藏三组复制的体细胞会近较少造 成的。此研究成果还提示二次冷藏三组的不止子身型大抵高于 一次冷藏三组，尽管没统计学负可称；在二次冷藏三组未 发子先天出现可称常，在一次冷藏三组发子1事例先天出现可称常；两 三组均未发子死滑或男婴死亡。尽管这些并非子殖细胞会 二次冷藏的研究成果，但从一定往往上总结了体细胞会在二 次冷藏后十分影摇动男婴的不止子故事情节。我们对此新 子儿随访至9岁，该幼儿身形愈合也就是说，智力愈合正 常，潜意识愈合也就是说。与之此前冻融体细胞会复制(FET)不止 子幼儿的随访结论一致[13,7]。Pelkonen等统计分析 了FET不止子夫妻俩的先天出现可称常的发子具体情况，普遍认为 FET不止子夫妻俩发子先天出现可称常的百分比与新鲜复制相似，最后Pelkonen等[14]对FET先祖夫妻俩进行时了一 项随访3年的研究成果，见到FET与新鲜复制不止子先祖 的身形愈合是相似的。还有研究成果见到ART后不止子 先祖的神经运动愈合上都与自然哺乳先祖无显著负 可称，普遍认为他们的神经愈合、社会感情及语言进修并无 负可称[117]。可见体细胞会冷藏对男婴长期以来愈合的影 摇动与新鲜复制体细胞会相似。而从我们的流感刊文来 看，子殖细胞会的二次冷藏也是相对稳定性的。 我们将子殖细胞会二次玻璃窗化冷藏后的体细胞会进行时复制 后赢取成功哺乳，足月分娩一身心中村康女婴，并进行时长达12年的随访，此幼儿身形愈合也就是说，智力愈合也就是说，潜意识愈合也就是说。普遍认为此子殖细胞会二次冷藏后体细胞会仍然不具比较好的种植想像力和愈合想像力。但此流感仅为个事例刊文，子殖细胞会连续不断冷藏是不是会引致体细胞会的挫伤仍不明 理应，复制连续不断冷藏的体细胞会是不是稳定性还需要大幅度的研究成果，因此在临床管理工并作之此前，我们仍应尽可能避免体细胞会的连续不断冻融。参考史料大抵。原始不止处：王雪，甄绿然，孙正怡，郁琦等，子殖细胞会期体细胞会二次冷藏停滞不前复制1事例的不止子故事情节和幼儿愈合具体情况随访[J],子殖快报，2018,27(12).